Čo je gélová elektroforéza?

Gélová elektroforéza je metóda oddeľovanie, identifikáciu a charakterizáciu zmesi proteínov, nukleových kyselín. Denaturované vzorky migráciu po aplikácii elektriny v tenkej, vlhké gélu zvyčajne vyrobené z polyakrylamidu alebo agarózy. Oddelené vzorky sú sfarbené tak oni môžu byť videní. Gélová elektroforéza sa používa bielkovín a nukleových kyselín a výskumu v nemocniciach pre identifikáciu neobvyklých proteínov alebo DNA vzory na diagnostikovanie chorôb, genetických chýb a genetických vzťahov. Príprava vzorky

je detergent, ako je sodný dodecylsulfonate (SDS), pridá k proteínu alebo nukleovej kyseliny, sa detergent spájať sa a rozvinúť (denaturovaný) proteínov a nukleových kyselín. Denaturácia bielkovín uľahčuje určiť ich molekulovú hmotnosť v elektroforéze. Množstvo vzorky potrebné, je zvyčajne 100 až 500 ng na zóny vzorky pre proteíny a od 5 do 100 ng na pásmo pre nukleovej kyseliny v celkovom objeme asi 25 až 40 mikrolitrov.
Gély

gél, typicky vyrobený z polyakrylamidu alebo agarózy, môže byť pripravený, alebo zakúpiť oddeliť tieto proteíny. Gél je veľa ako želatíny. To je väčšinou voda, ale je dostatočne pevná pre manipuláciu. Gély obsahujú pufer pre kontrolu pH. Gél je veľmi tenká (1 až 2 mm) a obdĺžnikové. Jedna strana vyzerá ako hrebeň s mnohými chýbajúcich zubov. Medzery sa nazývajú studne.
Sample Loading
fotografie

miesta gél v komore s pufrom a denaturovanej bielkoviny sú pridané do jamiek. Vzorky sa známou molekulovou hmotnosťou sú pridané do vonkajšej jamiek. Gély sú vyrábané s rôznym množstvom polyakrylamidu. Nízka pevnosť gélu (4 percentá), je lepšie pre separáciu s vysokou molekulovou hmotnosťou molekuly, zatiaľ čo vyššia pevnosť gélu (12 percent), sa používa pre vyššou molekulovou hmotnosťou molekúl. Gradientu sa menia v pevnosť gélu a oddelenie celý rad proteínov so stratou niektorých riešení.
Electromigration

Pri použití s ​​vysokým elektrickým napätím, denaturované proteíny pohybovať smerom k spodnej časti vrtu. Čím vyššia je hmotnosť proteínu, tým pomalšie sa pohybuje. Ak je elektrina vypnutá, bielkoviny zastaví. Jeden odstráni gél z komory a kamenia ho v miske s farbivom. Organické farbivá ako Coomassie modrej alebo kovových farbivá sa používajú na farbenie proteínov pri fluorescenčné farbivá ako Etídiumbromid sa používajú pre nukleových kyselín.
Analýza výsledkov

Po odstránení prebytočného škvrna, je vidieť, že zmes sa rozdelí na skupiny, ktoré vyzerajú ako rebríky. Poloha pásiem je v porovnaní s prepravné vzdialenosti normami pre stanovenie molekulovej hmotnosti vzorky v každom pásme. Gél môže byť dehydrovaný s alkoholom a vysuší tak, aby mohol byť uložený. Intenzita farby zo skupiny potom môžu byť merané za účelom stanovenia koncentrácie proteínu v každom pásme.
Vývoj protokolu
protokoly

Štandardné sú k dispozícii pre prácu s i- známe proteíny. Ak výskumník pracuje s neznámym vzorkou, pevnosť gélu, typ buffera môže pufer pH, napätia, dobu spustenia a škvrna všetky musia byť optimalizovaný pre dosiahnutie najlepšej separáciu a signál.
Protokoly