Ako si vyrobiť reštrikčné mape

V počiatkoch molekulárnej biológie, vedci bežne používa obmedzenia mapovanie pochopenie génov, ktoré študovali. V moderných výskumných laboratórií, je obmedzenie mapovanie z veľkej časti zastarané, pretože sekvenovanie stal sa viac široko dostupné a úspornejšie než v minulosti. Avšak, tam sú prípady, keď obmedzenie mape môže byť dostačujúca pre výskumníka vykonávať svoje vyšetrovanie. Celkový prístup k obmedzeniu mapovanie zahŕňa použitie tráviacich enzýmov rozobrať fyzicky vzorku DNA. Akonáhle budete merať produkty trávenia, môžete "zložiť" kúsky a odvodiť pôvodnú sekvenciu DNA. Veci, ktoré budete potrebovať
reštrikčných enzýmov
vzoriek DNA
Pufer internete Ľadový a horúca vodná kúpeľ
Gélová elektroforéza zariadenia
Zobraziť ďalšie inštrukcie
DNA Trávenie

1

Pridať štiepenia enzýmom do vzorky DNA. Použite EcoR1, bežne používaný enzým, napríklad.
2

Pridať túto zmes do tlmivého roztoku, čo je v podstate miestom pre reakciu nastať.
3

Zvýšte teplotu reakcie, ako je uvedené v New England Biolabs návodu. Každé obmedzenie enzým má špecifickú reakčnej teplotu, pri ktorej sa najlepšie funguje. Okrem toho, každý enzým má špecifickú nukleotidovej sekvencie, je navrhnutý tak, aby cieľ. EcoRI bude skenovať a znížiť DNA na sekvencie nukleotidov CAATTC. Toto presné poradie nukleotidov musí existovať enzýmu viazať a znížiť DNA. Až do tohto bodu, všetky materiály by mali byť uchovávané na ľade, aby sa zabránilo nežiaduce činnosť.
4

Po zatvrdnutí reakciu nastať, ako je uvedené v návode, spustite zmes v stroji gélovej elektroforézy oddeliť DNA fragmenty na základe veľkosti. Najmenší fragmenty bude pohybovať najďalej cez gélu.
5

Odmerajte vzdialenosť prejdená každým fragmentu DNA. Týchto päť bodov by sa mala opakovať s viacerými rôznymi enzýmami zvlášť.
Konštrukcia reštrikčné mape
6

použitím údajov získaných z gélu, zhromažďovať všetky informácie, ktoré ste našli použitie rôznych reštrikčných enzýmov.
7

odvodiť poradí reštrikčných miest porovnaním rôznych fragmentov dĺžky produkovanej každý enzým. Napríklad, ak enzým # 1 produkoval dva fragmenty o rovnakej dĺžke a enzýmov # 2 produkoval tri fragmenty rovnakej dĺžky, môžete k záveru, že enzým # 1 škrty v polke DNA a enzýmu # 2 rezy na DNA do tretiny.

8

Použitie závery uvedené v kroku 2, zostaviť poradie reštrikčných miest na DNA.