TMRE Protokol

tetrametylrodamín etyl (TMRE) je "pomalý, lipofilný, katiónové fluorescenčné farbivo reditribution" používaný v MitoPT ™ TMRE /TMRM membránovú mitochondriálnej potenciál Posúdenie Kit, vyrobené imunochemie Technologies, LLC. Tento proces pomáha zobraziť transmembránový elektrický gradient potenciálu v bunkách. Príprava testu
fotografie

protokol je jednoduché nasledovať, a trvá približne 20 minút spracovať pri teplote 37 stupňov Celzia. V živej bunky použité v teste môže trvať niekoľko hodín a niekoľko dní na prípravu na použitie. Kontrolné bunky môžu trvať niekoľko hodín na prípravu, pretože treba prinútiť k podstúpiť apoptózu.
Protokol Časť 1
bunky

Kultúra na hustotu optimálne pre apoptózy alebo oxidačný stres indukcia, podľa konkrétnej indukčné protokol, ale nie vyšší ako 10 (6) buniek /ml.
Protokol časť 2

Súčasne čas, kultúra non-indukovanej negatívna kontrola bunkovej populácie (v rovnakej hustote ako indukovanej populácie.
protokol Časť 3

indukovať apoptózu alebo zámerne depolarize mitochondrie nasledujúce požadovaný protokol.
protokol Časť 4

Pripravte 1X Assay /premývacím pufrom.
Protokol Parts 5-8

Pripravte 1 mm alebo 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM zásob. Za časť protokolu 6, pripraviť 1:100 riedenie 1 mm, alebo 01:20 nariedení 0,2 mm MitoPT ™ TMRE /TMRM riešenie pre stúpli na vzorky bunkových kultúr.

časť protokolu 7, Farba bunky pomocou konečnej 20-200 nM koncentráciu MitoPT ™ TMRE /TMRM riešenie.

časti protokolu 8, analyzovať údaje.