MBP Čistenie Protokoly

MBP alebo maltóza binding proteín sa nachádza vo baktérie Escherichia coli, ktorá je súčasťou črevnej flóry ľudí i zvierat. Čistenie MBP zahŕňa rad postupov zameraných na separáciu proteínu v zložky. V molekulárnej biológii, MBP čistenie je životne dôležitý proces pre štúdium štruktúry a funkcie tohto proteínu. MBP čistenie protokoly obsahujú MBP rozpustené bielkoviny čistenie, drobného MBP-fusion a maltózu viažuci proteín fusion tag čistenie. MBP istenie Proteíny Purification

Počas tohto protokolu, technici umývanie 20 ml polymérnej živice amylózy roztokom Atris pri pH 7,4, chlorid sodný, mercaptoetanolu (ME) a ​​etyléndiamíntetraoctovej kyseliny (EDTA), v súlade s protokolmi Online. Vzorky buniek sa pridá, odstredí a analyzované na gélovou elektroforézou. Vzorky boli tiež analyzované v chromatographer, kde technici eluát alebo sledovať Riešením je zložkou pri priechode chromatografickej kolóny.
Small Scale MBP-fúzny proteín Čistenie

Podľa Hebrejská univerzita v Jeruzaleme, biológovia používajú činidlo izopropyl BD-1-thiogalaktopyranosid (IPTG), spin bunkové kultúry po dobu 10 minút pri 8000 otáčkach za minútu pri 39,2 stupňov Celzia. Neskôr sa odstrániť supernatant a miešajú chladnú PBS pufra na vzorku, ktorý je rozdelený do niekoľkých skúmaviek a odstredí znova. Vzorky sú potom udržiava na -112 stupňov Fahrenheita k zadnej analýzu.
Maltózu viažuci proteín Fusion Tag čistenie
tagy

Affinity sú geneticky skonštruované molekuly používané v molekulárnej biológii pre detekciu a čistenie proteínov. Tento protokol je komplexný súbor postupov, rozdelených do troch etáp, ktoré zahŕňajú výstavbu polyhistidine bielkovín značky (HisMBP) pilotný experiment vyhodnotiť rozpustnosť proteínu a rozsiahlu očistenie MBP molekúl, podľa prírody protokolov . Okrem vzoriek E.coli, aké používajú technici ampicilín, kanamycín, IPTG, anhydrotetracyklinu, glukózový monohydrát, mobilné lyzačného pufra, DNA polymeráza, PCR, Tris-acetát-EDTA a Etídiumbromid.